资讯|19545-26-7|Wortmannin参考用途

常用名

渥曼青霉素

英文名

Wortmannin

CAS号

19545-26-7

分子量

428.432

密度

1.4±0.1 g/cm3

沸点

615.6±55.0 °C at 760 mmHg

分子式

C23H24O8

熔点

234-240oC

闪点

326.1±31.5 °C

体外研究

Wortmannin不可逆地抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-激酶）活性，与110-kDa蛋白结合（IC50为3 nM），对RBL-2H3细胞中的PI4-激酶没有影响。 Wortmannin还抑制FcεRI介导的组胺分泌和白三烯释放，对酪氨酸激酶Lyn的激活没有影响[1]。在完整的A549肺腺癌细胞中，渥曼青霉素在与放射增敏所需的浓度密切相关的浓度下抑制DNA-PK和ATM。此外，用渥曼青霉素预处理A549细胞导致抗辐射DNA合成，这是ATM缺陷细胞的特征性异常[2]。渥曼青霉素对MLCK的抑制不受钙调蛋白或肽底物的影响，而高浓度的ATP则会降低。渥曼青霉素直接与MLCK的催化结构域相互作用，并导致酶活性的不可逆损失。 Wortmannin对cAMP依赖性蛋白激酶，cGMP依赖性蛋白激酶和钙调蛋白依赖性蛋白激酶II无抑制作用，对蛋白激酶C活性影响不大[3]。 Wortmannin也是Polo样激酶3（Plk3）的有效抑制剂。 Wortmannin有效抑制纯化的Plk3的活性，IC50为48 nM。渥曼青霉素是Plk1和AX7503的有效抑制剂，四甲基罗丹明 - 渥曼青霉素缀合物是用于标记Plk1的活性依赖性探针。渥曼青霉素抑制Plk1-AX7503反应性，IC50为5.8nM。渥曼青霉素以剂量依赖性方式抑制Plk3与AX7503反应。用于抑制AX7503标记Plk3的渥曼青霉素的IC 50值确定为49nM。 Wortmannin通过靶向其ATP结合位点中的保守赖氨酸残基共价标记Plk1和Plk3。渥曼青霉素抑制Plk1和Plk3的效力与其对PI3K的抑制相似。 Wortmannin也抑制Plk2和Plk4 [6]。

体内研究

Wortmannin在小鼠的正常组织（肺，心脏和脑匀浆）和肿瘤组织中抑制磷脂酰肌醇3-激酶 - 蛋白激酶B（PKB）/ Akt磷酸化，没有死亡率或0.7mg / kg的急性毒性。结合LY188011，渥曼青霉素可显着增加细胞凋亡，抑制原位肿瘤的肿瘤生长，而单药治疗均不能[4]。渥曼青霉素（1 mg / kg）抑制小鼠SW1990的腹膜转移，没有任何体重减轻[5]。

激酶实验

用肽底物（KKRPQRATSNVFS-NH2）或肌球蛋白轻链测定MLCK活性。肽底物（24μM）在含有25mM Tris-HCl（pH 7.5），0.5mg / mL牛血清白蛋白，4mM MgCl 2,0.5mM CaCl 2,2.6nM钙调蛋白，1.5nM MLCK和400的反应混合物中磷酸化。 μMATP，终体积为0.25 mL。在没有ATP的28℃下预孵育10分钟后，通过在28℃下加入ATP开始反应，并在30分钟后通过加入0.1mL 10％（v / v）乙酸终止反应。通过高效液相色谱分析混合物：柱，Unisil Pack 5C18 4.6×150mm;溶剂，18％（v / v）乙腈，0.1％（v / v）三氟乙酸水溶液;流速，1.0 mL / min;温度，40°C;检测，220nm处的吸光度。由磷酸化形式的峰面积与未磷酸化形式的峰面积之比计算反应百分比。在上述条件下测量的比活性为0.81μmol/ min / mg。肌球蛋白轻链（108μg/ mL）在含有25mM Tris-HCl（pH 7.5），0.5mg / mL牛血清白蛋白，4mM MgCl 2,0.5mM CaCl 2,4.2nM钙调蛋白，0.92nM酶的反应混合物中磷酸化，和10μM[γ-32P] ATP（100-900cpm / pmol），终体积为0.25mL。在没有ATP的30℃下预孵育3分钟后，通过在30℃下加入[γ-32P] ATP开始反应，并在5分钟后通过加入0.125mL三氯乙酸终止反应。将酸可沉淀的材料收集在硝酸纤维素膜过滤器上，并用4mL 1mL等分试样的5％（v / v）三氯乙酸洗涤。使用Packard Tri-Carb液体闪烁光谱仪4530型在甲苯闪烁液中测量过滤器上的放射性。在该条件下测量的比活性为1.23μmol/ min / mg。